使用固相萃取仪时的注意事项
发布于 2023/02/15阅读(du)(1002)来源 ltrlw
摘要
使用固相萃取仪时的注意事项
内容
我们在用固相萃取仪时，面临(lin)的(de)一个问(wen)题(ti)就是:液体应该以什(shen)么速率过(guo)柱流出(chu)，我的(de)经验是，要想效果好，就要慢(man)，尽量慢(man)。.
对(dui)于(yu)固相萃取(qu)仪(yi)柱中的(de)填料，我们如果局部放大地(di)看，能够看到其实它(ta)们是有很(hen)多的(de)空際(ji)，液体流(liu)通的(de)渠道很(hen)多，如果流(liu)得(de)快，相当比例的(de)待测组分还来不(bu)及与填料充(chong)分作(zuo)用就地(di)从通道流(liu)失;所以要(yao)慢，给(ji)它(ta)们一个充(chong)分作(zuo)用的(de)机会。
如(ru)何慢呢?一个窍门(men)就是(shi)(shi)不要用(yong)(yong)(yong)配合抽气机使用(yong)(yong)(yong)的所谓固相萃(cui)取仪器，而采(cai)用(yong)(yong)(yong)再普通(tong)不过的重(zhong)力(li)(li)法(fa)。利用(yong)(yong)(yong)重(zhong)力(li)(li)的作用(yong)(yong)(yong)使液体向(xiang)下流(liu)出。在(zai)实(shi)验速度上，重(zhong)力(li)(li)法(fa)远不如(ru)吸力(li)(li)法(fa)，但是(shi)(shi)在(zai)实(shi)验效(xiao)果方面，重(zhong)力(li)(li)法(fa)远比吸力(li)(li)法(fa)优胜，用(yong)(yong)(yong)吸力(li)(li)法(fa)只能得到谱(pu)带(dai)吸附(fu)(fu)，用(yong)(yong)(yong)重(zhong)力(li)(li)法(fa)却能得到柱头(tou)吸附(fu)(fu)，在(zai)速度和(he)效(xiao)果两者的平衡中，我们还是(shi)(shi)倾向(xiang)于优先保证(zheng)好的效(xiao)果。
举例来(lai)说，一(yi)个3ml500mg的C18小(xiao)柱，如果(guo)(guo)加甲(jia)醇活化，其甲(jia)醇全(quan)部流至(zhi)筛(shai)板时(shi)间约为(wei)20分钟，而在过样品液(ye)时(shi)，25ml 的液(ye)体*多(duo)2小(xiao)时(shi)可以流完，而且用(yong)重力(li)法(fa)如果(guo)(guo)得当，工作速率不(bu)比吸(xi)力(li)法(fa)差很多(duo)。因为(wei)我们可以充分利用(yong)空闲时(shi)间，用(yong)吸(xi)力(li)法(fa)*须有人在旁(pang)边守候，而重力(li)法(fa)由于不(bu)需(xu)要(yao)用(yong)电(dian)，可以充分利用(yong)午休(xiu)和(he)晚(wan)上时(shi)间过柱，液(ye)体量大时(shi)接个堆(dui)叠接头和(he)延(yan)长管即可，安排好实(shi)验步骤(zhou)，工作效率一(yi)样很高。另外(wai)，重力(li)法(fa)不(bu)需(xu)要(yao)抽气机和(he)固(gu)相(xiang)萃取仪器(qi)。
在(zai)固相萃(cui)取仪条件选(xuan)择上，有人为了提(ti)高提(ti)取效率，尽量(liang)多加液体，或选(xuan)择填料量(liang)大的(de)小柱，我(wo)觉得大可不(bu)*如此。尤其(qi)在(zai)用重力(li)法时，由(you)于效率高，很多情况下是柱头吸附，并不(bu)是所有的(de)填料都在(zai)起作用，填料多了不(bu)仅液体流出速度会更慢，而且在(zai)洗脱时的(de)扩散会很明显。
因此建(jian)议，够(gou)用(yong)就行(xing)，在能保证(zheng)效率(lv)时，填料(liao)尽量少，加液也不(bu)宜多。
固相萃(cui)取(qu)仪从原理上是色谱分(fen)离，但是在操作时*好(hao)只(zhi)把它作为(wei)吸附萃(cui)取(qu)剂使用，由于填料性质、松紧常有(you)差异，因此在实际实验(yan)中不*因为(wei)追(zhui)求效果的(de)*佳化(hua)而(er)设(she)计(ji)出很复杂的(de)洗脱程序。
在建立条件中，我们应该尽(jin)量多(duo)利用现成的资料，尽(jin)快地建立起体(ti)系，同时(shi)要(yao)对操作(zuo)过于复(fu)杂的步骤保持(chi)警惕性，在实验(yan)效果(guo)，实验(yan)速(su)率和易(yi)操作(zuo)性三(san)者(zhe)中取得(de)平衡(heng)点。
固相萃取柱*好只用一(yi).次。因为(wei)(wei)从严格(ge)的(de)(de)意义上来说，很多物质的(de)(de)吸附(fu)是不可(ke)逆的(de)(de)，一(yi)次吸附(fu)， 无法洗脱，影(ying)响着下一(yi)次吸附(fu)，虽然有人做过重(zhong)复利用的(de)(de)实验，但是总(zong)体来说为(wei)(wei)了(le)节省- -点(dian)经费而大(da)大(da)增加了(le)结果的(de)(de)不可(ke)靠性(xing)(xing)和不确定(ding)性(xing)(xing)，是很不合算的(de)(de)行为(wei)(wei)。
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